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離心式去垢劑去除柱

離心式去垢劑去除柱

產(chǎn)品編號:DD0550

產(chǎn)品規格:10套/包

數量
價(jià)格 ¥0

離心式去垢劑去除柱

貨號

名稱(chēng)

規格

DD0550

離心式去垢劑去除柱(處理25-100 μl蛋白樣品)

10

 

● 產(chǎn)品組成:

貨號

名稱(chēng)

規格

DD0550-01

0.5 ml去垢劑去除柱(含套管)

10

DD0550-02

2 ml尖底離心管

10個(gè)

 

● 產(chǎn)品介紹:

離心式去垢劑去除柱能夠通過(guò)離心快速去除蛋白溶液或質(zhì)譜分析中肽段溶液中的常用去垢劑,包括離子型去垢劑,非離子去垢劑和兩性離子去垢劑。在蛋白實(shí)驗中,去垢劑在促進(jìn)蛋白溶解,增加蛋白穩定性以及阻止蛋白聚集方面都有重要作用。然而,蛋白溶液中的去垢劑會(huì )對下游實(shí)驗產(chǎn)生影響,如ELISA,等電聚焦以及質(zhì)譜分析等。在質(zhì)譜分析中,去垢劑會(huì )與肽段形成加合離子抑制肽段離子化,導致m/z值的遷移。因此,質(zhì)譜分析中去除肽段溶液中多余的去垢劑是影響分析結果的重要因素。該去除柱可以高效(>95%)去除樣品中各種常用的去垢劑(濃度范圍1-5%)。

去垢劑去除柱參數如下:

柱體積

填料溶脹后體積

處理樣品體積

推薦起始樣品濃度

去除效率

0.5 ml

~0.6 ml

25-100 μl

0.5 μg/μl

~95%

● 貯存、運輸和效期:

4℃貯存(不能冷凍);常溫運輸;有效期1年。

● 操作步驟

一、 去垢劑去除柱預處理:

1.1 取出柱子,放入套管中。  

1.2 旋開(kāi)管蓋,不要擰掉柱子底部堵頭,加入0.4 ml 1×PBS,蓋緊管蓋,常溫靜置2 min,活化填料。

1.3 擰掉柱子底部堵頭,將柱子放入套管中,1000 g 離心1 min,棄流穿液。

注:離心力不要高于1000 g,過(guò)高的離心力會(huì )損傷填料,降低去垢劑去除效率。

1.4在柱子管蓋上標記填料在柱子內的傾斜方向,隨后離心步驟均按同一傾斜方向在離心機內放置柱子。

1.5柱子中加入0.4 ml 1×PBS,1000 g 離心1min,棄流穿液。至此,柱子活化結束,備用。

二、樣品去垢劑去除:

2.1 將柱子轉移到2 ml尖底離心管中,加入25-100 μl待處理樣品(樣品濃度高于0.5 μg/μl),常溫靜置2 min。

2.2 1000g 離心2 min,收集離心管內樣品。

注意事項:

1. 去垢劑去除效果:可以高效的(>95%)去除樣品中各種常用的去垢劑(濃度范圍1-5%)。

去垢劑去除效率和蛋白回收效率

去垢劑

濃度

去除效率

BSA回收效率

(上樣量100 μg

SDS

2.5%

99%

95%

脫氧膽酸鈉

5%

99%

99%

CHAPS

3%

99%

90%

Triton X-100

2%

99%

87%

NP-40

1%

95%

91%

Brij-35

1%

99%

97%

Tween-20

0.25%

99%

87%

Octyl glucoside

5%

99%

90%

2. 樣品處理體積要在柱子處理范圍內,該去除柱最多處理體積是100 μl樣品,過(guò)多會(huì )導致收集 

管中液體浸沒(méi)到去除柱。

3. 當樣品濃度過(guò)低時(shí)(<0.5 μg/μl),需先將樣品濃縮到所需體積或所需濃度。

常見(jiàn)問(wèn)題:

常見(jiàn)問(wèn)題

可能原因

解決方法

蛋白回收率偏低

蛋白濃度過(guò)低(<0.5 μg/μl)

對蛋白液進(jìn)行適當濃縮

樣品不能流穿

未扭掉柱子底部的堵頭

按照步驟1.3扭掉堵頭

實(shí)驗示例:


 
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