PPA，Plant Tissue Culture Preservative Agents  

PPA –植物組織培養抗菌保護劑

使用操作說(shuō)明

產(chǎn)品名稱(chēng):PPA- Plant Tissue Culture Preservative Agents

（植物組織培養抗菌保護劑）

貨號：PPA001-50ml

保存條件：4℃

運輸條件：常溫運輸

性狀：無(wú)色至琥珀色透明液體

pH 值：3.8

有效期：見(jiàn)瓶身標簽說(shuō)明

產(chǎn)品描述：

1.    PPA是一種熱穩定的抗菌劑，用于植物組織培養中植物的微生物污染防治與清除；

2.   在合理的使用劑量下，PPA是一種非常有效的植物組培抗菌劑與保護劑，不會(huì )對植物的生長(cháng)（如種子萌發(fā)，愈傷增殖、再生等）產(chǎn)生任何影響，可視為培養基標準配方成份；

3.   PPA主要用于預防和消除來(lái)自空氣、水源或者人體接觸等外界因素導致的植物組培過(guò)程中的微生物污染，同時(shí)，對于植物內生菌也同樣具有非常好的抑制效果；

4. PPA廣泛適用于絕大多數被子植物和裸子植物，但是不推薦用于蕨類(lèi)植物、藻類(lèi)等水生植物；

5.   PPA具有熱穩定性，能直接加入培養基高溫滅菌而不會(huì )影響使用效果，使用更加方便；

6.    PPA相對于常規抗生素而言，性?xún)r(jià)比更高。

作用機理：

PPA的活性成分能滲透細菌或者真菌細胞壁，抑制呼吸作用中三羧酸循環(huán)和電子傳遞鏈過(guò)程中關(guān)鍵酶的活性，同時(shí)也能阻斷細菌和真菌吸收和利用培養基中單糖和氨基酸的過(guò)程，從而實(shí)現預防和清除植物組織培養過(guò)程中的微生物污染。

相對抗生素的優(yōu)勢：

1.    PPA能廣泛抑制和清除細菌和真菌的污染，并防止真菌孢子的萌發(fā)；

2.    PPA是通過(guò)抑制多種酶的活性而達到抑菌效果，從而能避免耐藥突變體的發(fā)生；

3.    PPA具有熱穩定性，無(wú)需過(guò)濾滅菌，能直接加入培養基高溫滅菌而不會(huì )影響使用效

果，使用更加方便；

4.    PPA性?xún)r(jià)比更高，可更加廣泛的應用于更多的科學(xué)研究、作物育種、組培苗工廠(chǎng)化

生產(chǎn)中。

以下操作說(shuō)明是針對大多數情況下的常規使用說(shuō)明，必要時(shí)，可根據具體植物樣本情況進(jìn)行適當調整。

1.    常規用量：

一般推薦使用使用濃度為 0.05%-0.2%（1L 培養基中加入 0.5-2 ml PPA）;

愈傷增殖，器官形成，胚性組織發(fā)育等使用濃度為 0.05%-0.075%（1L 培養基中加入 0.5-0.75 ml PPA）。

說(shuō)明：

(a) 含有 PPA的培養基無(wú)需在超凈工作臺中分裝，在培養基凝固以后將培養瓶/皿蓋子蓋好即可。如使用自動(dòng)灌裝系統，建議在灌裝前后將分裝管用高壓滅菌熱水處理；

(b) 如果培養基儲存液保存在無(wú)菌容器中并未經(jīng)污染的情況下，加入 PPA配制的培養基無(wú)需再次過(guò)濾或者高溫滅菌。如果是營(yíng)養培養基，如含有 200 mg/L 甚至更高濃度氨基酸或者蛋白質(zhì)的培養基，建議過(guò)濾滅菌。

2.    植物內生菌污染處理：

(a) 種子：PPA不推薦用于直接處理含有大量的細菌或真菌孢子的種子滅菌，對于種子離體萌發(fā)，建議先采用傳統方法消毒，然后置于含 2-3% PPA的全培養基礎鹽溶液中，輕輕攪拌 4-12 小時(shí)，此過(guò)程千萬(wàn)不能添加 Tween20 和調節 pH，處理完成以后直接插入含有 PPA (草本植物 0.05-0.1%，木本植物 0.2%)的培養基里；

(b) 外植體：以 1cm 外植體為例，將外植體置于含 4-5% PPA的全培養基礎鹽溶液中，輕輕攪拌 4-12 小時(shí)，此過(guò)程千萬(wàn)不能添加 Tween20 和調節 pH，處理完成以后直接插入含有 PPA (草本植物 0.05-0.1%，木本植物 0.2%)的培養基里；

(c) 對于塊莖，球莖和鱗狀物的觀(guān)賞植物樣本：將其整體放入傳統消毒劑中攪拌消毒處理以后，用水沖洗干凈，將材料切成薄片，置于含 4-5% PPA的全培養基礎鹽培養液中，輕輕攪拌 4-12 小時(shí)，此過(guò)程千萬(wàn)不能添加 Tween20 和調節 pH，處理完成以后無(wú)需沖洗直接插入含有 0.1-0.2%的 PPA的培養基里進(jìn)行培養。

3.   如果厚的外植體、污染嚴重的植株、種子等樣本經(jīng)過(guò)以上處理仍得不到理想效果，可嘗試以下操作：

(a) 將材料浸泡在水中持續攪拌處理(松軟組織攪拌 1 小時(shí)，硬實(shí)組織攪拌 2 小時(shí))；

(b) 將材料在含 50%的 PPA全培養基礎鹽溶液中攪拌處理 5-10 分鐘，此過(guò)程千萬(wàn)不能添加 Tween20 和調節 pH；

(c) 無(wú)需沖洗，將處理過(guò)的材料直接加入到培養基中即可。對于真菌污染，可在培養基中加入適當濃度的 PPA。對于真菌細菌混合性污染，建議在培養的第一個(gè)月的培養基中加入 0.05%-0.2%的 PPA。

4.    嚴重污染材料污染去除與搶救（重污染不超過(guò)一周）：

(a) 將污染的材料至于流水中用軟刷刷洗，然后置于含 50% PPA的無(wú)菌水溶液中攪拌

5-15 分鐘，對于細菌或者混合性污染，建議使用 100% PPA與 0.6 g/L 的檸檬酸無(wú)菌水溶液按 1：1 混合的低 pH(2.8-3.2)的酸性溶液處理；

(b) 處理后的材料無(wú)需清洗，直接插入含 0.05%-0.25 的 PPA的培養基中培養至少一個(gè)月以上，其中前 10 天需要弱光培養；對于一些真菌、孢子和細菌污染隱藏較深，PPA無(wú)法接觸到的部位，建議在初步的清洗以后，將材料切開(kāi)，然后再放入含 50% PPA的無(wú)菌水溶液中攪拌 5-15 分鐘處理。

5.    農桿菌的去除：

共培養以后，將樣本用無(wú)菌水清洗，然后將樣本浸沒(méi)在 100% PPA（補充 4X 的培養基鹽溶液）中處理 2 分鐘，取出后用無(wú)菌紙吸干后并置于常用抗性培養基中培養，3 周后，更換到只含有 0.05%-0.075% PPA (無(wú)常用抗生素)的培養基中培養。

使用注意事項：

1. 在所有 PPA消毒處理外植體的過(guò)程中，盡量保證容器的體積足夠大，并使外植體材料所有面積與含 PPA 的處理溶液充分接觸，以保證消毒效果；

2. 如果外植體出現高度氧化現象，不要扔棄，大約 50%的外植體在 4-6 周內即可恢復；

3. 50% PPA的處理溶液可以重復使用但是不推薦，因為使用次數和效果受外植體的體積與接種密度的影響。將 50% PPA的處理溶液保存在 4oC可適當延長(cháng)其活性。

4. 如果 50% PPA溶液處理效果不理想，可采用 100% PPA溶液進(jìn)行處理，處理方法相同，但使用次數不得超過(guò) 10 次。

安全說(shuō)明：

1. 雖然 PPA是無(wú)毒性的，但是在使用過(guò)程中還需盡量避免直接與人體皮膚等直接接觸，建議使用時(shí)佩戴手套，保持空間空氣流通，如不慎吸入，先馬上因大量純凈水后立即就醫，如不慎入眼，立刻用大量水沖洗眼睛 15 分鐘，用肥皂清洗 PPA接觸過(guò)的皮膚部位；

2.  含 PPA的培養基垃圾處理與常規培養基處理方法相同。