梯度凝膠生成系統
梯度膠生成系統通過(guò)從多板制膠器底部注入凝膠，可在多板制膠器中灌制多達12塊厚度為0.75、1.0或1.5mm的凝膠。當灌制凝膠數少于12塊時(shí)，丙烯模塊可充當空間填充物。
多板制膠器兼容市面上多種玻璃板，如伯樂(lè )短板和長(cháng)板玻璃以及U型玻璃板。
一 開(kāi)箱后確認包裝包含以下配件：
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貨號
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名稱(chēng)
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組成
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RT-GZY02-1
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多板制膠器
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多板制膠器
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一個(gè)
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分隔片
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20片
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填充塊
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5片
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藍色閥門(mén)
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一個(gè)
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一端帶接頭硅膠管（1米 ）
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一根
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RT-GZY02-2
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100ml梯度膠混合儀
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梯度混合儀
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一個(gè)
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一端帶接頭硅膠管（1米 ）
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一根
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磁力攪拌子
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兩個(gè)
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藍色閥門(mén)
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一個(gè)
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RT-GZY02-3
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蠕動(dòng)泵
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蠕動(dòng)泵（帶接頭）
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一個(gè)
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電源
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一個(gè)
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二 使用說(shuō)明：
1 按照圖示將系統連接：
將帶接頭的硅膠管一端插入到梯度混合儀側方插口，另一端與蠕動(dòng)泵下方硅膠管接頭連接（蠕動(dòng)泵溶液方向是一般為下進(jìn)上出）。藍色閥門(mén)插入到多板制膠器接口，將不帶接頭硅膠管截取適當長(cháng)度一端與藍色閥門(mén)連接，另一端與蠕動(dòng)泵上方硅膠管接頭連接。藍色閥門(mén)旋鈕方向與硅膠管平行為開(kāi)啟，旋轉至與硅膠管垂直方向為關(guān)閉。梯度混合儀左側桿狀旋鈕與地面垂直為開(kāi)啟，旋轉與水平面有夾角為關(guān)閉。
2 蠕動(dòng)泵使用方法：
按照圖示調節蠕動(dòng)泵。灌裝速度不要太快。
3 梯度膠配制：
梯度混合儀加入溶液前，首先把梯度混合儀閥門(mén)關(guān)閉（旋轉旋鈕與水平面有夾角為關(guān)閉）。
加入溶液原則：左槽（靠近旋鈕閥門(mén)）加高濃度溶液；右槽（靠近出口）加低濃度溶液。
將磁力攪拌子放入右槽中，打開(kāi)磁力攪拌器，轉動(dòng)轉子。
可以選擇RTD6160 4-18%梯度凝膠配制試劑盒或者自己按照下表配制溶液，以制備4-20% SDS-PAGE 厚度1.0mm梯度膠為例：
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貨號
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左槽 20%
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右槽 4%
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總體積70
ml
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總體積70
ml
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AC2913
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30% PAA(29:1)
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46.7 ml
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9.3 ml
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蒸餾水
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5.8 ml
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43.2 ml
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TS050
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4×Tris/SDS分離膠緩沖液 pH8.8
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17.5 ml
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17.5 ml
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左右槽上述溶液加完后，打開(kāi)梯度混合儀桿狀旋鈕閥門(mén)，使閥門(mén)桿與水平面垂直，保持左右槽溶液貫通。
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AP020P
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10% 凝膠促凝劑
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180 μl
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350 μl
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催化劑加入量少于單板制膠，一定不能多加，否則凝膠太快會(huì )堵塞管道
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TA0761
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TEMED
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18 μl
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35 μl
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37℃恒溫箱凝膠 2-3小時(shí)。
注：凝固與實(shí)驗室溫度密切相關(guān)。冬天氣溫低于18度，凝固會(huì )很慢。
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4 多板制膠器使用：
使用前將多板制膠器填充塊兩側的保護膜揭掉；
準備好制膠用的厚玻片和短玻片。
將厚玻片和短玻片對齊并在短玻片前方放一張分隔片，此為一套玻板三明治組合；
將多板灌膠器放倒，以厚玻板在下的方式放入玻板三明治組合，最多可放12套；
插入密封擋板，在最后一塊填充塊或者最后一組玻板組合前插入適量的分隔片以保證玻板和填充塊壓緊，然后擰緊螺絲。
在密封擋板下面小孔插入閥門(mén)，并打開(kāi)閥門(mén)（閥門(mén)旋鈕與硅膠管平行為開(kāi)啟）。
5 灌膠操作：
重要步驟：
灌膠前事先檢查：梯度混合儀旋鈕是否為開(kāi)啟狀態(tài)（桿狀旋鈕與水平面垂直為開(kāi)啟）
磁力攪拌子是否轉動(dòng)
蠕動(dòng)泵是否為關(guān)閉狀態(tài)
多板制膠器藍色閥門(mén)是否為開(kāi)啟狀態(tài)（藍色旋鈕與硅膠管平行為開(kāi)啟）
檢查無(wú)誤后，打開(kāi)蠕動(dòng)泵，使用a模式，調節數字為25，開(kāi)始灌膠操作。至多板制膠器中的溶液至頂部接近溢出時(shí)，首先關(guān)閉多板制膠器藍色閥門(mén)（旋鈕與硅膠管垂直為關(guān)閉）；
暫停蠕動(dòng)泵；迅速在梯度混合儀左右槽中加滿(mǎn)蒸餾水，打開(kāi)蠕動(dòng)泵，徹底沖洗管道。
注：次步驟非常重要，不立即徹底沖洗，殘余的凝膠會(huì )堵塞梯度混合儀和管道。
仔細插入梳子，盡量一次成功，避免產(chǎn)生氣泡。
37℃ 恒溫箱中凝固2小時(shí)。
注：凝固溫度非常關(guān)鍵，當室內溫度低于18度時(shí)，凝固時(shí)間會(huì )很長(cháng)。
6 拆膠：
待凝膠凝固好后，打開(kāi)多板制膠器螺絲，用膠鏟在兩板之間輕輕撬動(dòng)，注意不要誤撬玻璃短板，否則將導致玻璃板和膠之間產(chǎn)生氣泡，使得凝膠無(wú)法使用。用水將每板凝膠沖洗干凈，自封袋封好，加入2 ml 1×電泳緩沖液保持潤濕，4℃水平放置，可以貯存3-4周。
產(chǎn)品組成清單：
1. 梯度膠生成儀 4500元
2. 多板制膠器 1600元
3. 恒流泵 500元
