1.4.4 4℃16,000g離心15分鐘，去掉上清，保留沉淀。
1.5 細胞組蛋白提?。?/b>
1.5.1 沉淀重懸于0.25 ml 提取緩沖液中，超聲處理（推薦130W功率超聲2分鐘，超聲2秒，停頓3秒），冰浴30分鐘，間歇混勻。
注：超聲處理為必須步驟，否則沉淀很難徹底溶解，大大降低組蛋白提取得率。
1.5.2 4℃ 16000g 離心10分鐘，收集組蛋白上清。
1.5.3 即用型中和緩沖液配制：
取適當體積的中和緩沖液，在使用前數分鐘內加入1/100體積的PMSF（100×），1/40體積去乙?；敢种苿┖?/500體積
1M DTT，配成即用型中和緩沖液，隨后立即放于冰上待用。
1.5.4 組蛋白上清中加入0.3倍體積即用型中和緩沖液，混勻，即為組蛋白提取溶液。
注：組蛋白溶液電泳檢測時(shí)，如果加入上樣緩沖液后溶液變黃，加入1/10體積中和緩沖液將顏色調整為藍色后再上樣。
1.6 組蛋白貯存：
組蛋白溶液-20℃貯存一周或-80℃長(cháng)期貯存。
二 新鮮組織組蛋白提?。?/b>
2.1即用型裂解緩沖液配制：
常溫融解試劑盒中的試劑，溶解后立即放置在冰上，混勻。取適當體積的裂解緩沖液，在使用前數分鐘內加入1/100體積的PMSF（100×）和1/40體積去乙?；敢种苿?，配成即用型裂解緩沖液，隨后立即放于冰上待用。
2.2準備組織：
組織塊迅速置于預冷的1×PBS 中，漂洗數次，濾紙吸干水分，將組織切成細小的組織塊，稱(chēng)重組織，按照下表加入各試劑的量
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組織重量（mg）
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即用型裂解緩沖液（μl）
第一次裂解
|
即用型裂解緩沖液（μl）
第二次裂解
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50
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1000
|
500
|
注：50
mg新鮮組織相當于細胞沉淀體積（PCV，Packed Cell Volume）約為100 μl。
2.3 組織裂解：
2.3.1第一次裂解：組織中加入即用型裂解緩沖液（10倍PCV體積），用玻璃勻漿器冰浴勻漿10-20次,以徹底裂解細胞，收集裂解混合物，冰浴處理15分鐘，間歇混勻。
2.3.2 第二次裂解：4℃ 600 g離心5
min收集細胞，盡最大努力吸盡上清，細胞沉淀中加入即用型裂解緩沖液（5倍PCV體積）。
2.3.3用超聲破碎細胞（推薦130W功率超聲1分鐘，超聲2秒，停頓3秒）或用玻璃勻漿
器冰浴勻漿5-10次或使用注射器用27G針頭處理裂解物10-15次（貨號：PE2719，蛋白提取針頭套裝）,以徹底裂解細胞，收集裂解混合物，冰浴處理15分鐘。
注：此步驟不要過(guò)度勻漿或超聲處理，否則得到的組蛋白會(huì )污染較多的胞漿蛋白，可以用臺盼藍染色觀(guān)察細胞裂解情況，建議70-80%細胞裂解為適宜裂解程度。加入裂解緩沖液后，細胞膜完全破裂，胞漿完全釋放，但細胞核保持完整。鏡檢下可以看到完全染成藍色的細胞核。
2.3.4 16,000g 4℃離心15分鐘，去掉上清，保留沉淀。
2.4 組織組蛋白提?。?/b>
2.4.1 沉淀重懸于0.25 ml 提取緩沖液中，超聲處理（推薦130W功率超聲2分鐘，超聲2秒，停頓3秒），冰浴30分鐘，間歇混勻。
注：超聲處理為必須步驟，否則沉淀很難徹底溶解，大大降低組蛋白提取得率。
2.4.2 4℃16000g 離心10分鐘，收集組蛋白上清。
2.4.3 即用型中和緩沖液配制：
取適當體積的中和緩沖液，在使用前數分鐘內加入1/100體積的PMSF（100×），1/40體積去乙?；敢种苿┖?/500體積
1M DTT，配成即用型中和緩沖液，隨后立即放于冰上待用。
2.4.4 組蛋白上清中加入0.3倍體積即用型中和緩沖液，混勻，即為組蛋白提取溶液。
注：組蛋白溶液電泳檢測時(shí)，如果加入上樣緩沖液后溶液變黃，加入1/10體積中和緩沖液將顏色調整為藍色后再上樣。
2.5 組蛋白貯存：
組蛋白溶液-20℃貯存一周或-80℃長(cháng)期貯存。