細胞增殖-毒性檢測試劑盒

Cell Counting Kit-8(CCK-8)

● 產(chǎn)品組成：

●  產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。 WST-8是一種類(lèi)似于 MTT的化合物，在電子耦合試劑1-Methoxy PMS存在的情況下，可以被還原生成橙黃色水溶性的甲臜（Formazan）。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數目呈線(xiàn)性關(guān)系。

WST-8與傳統的MTT，XTT，MTS，WST-1相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先，反應生成的formazan是水溶性的，可以省去后續的溶解步驟。其次，WST-8更加穩定，檢測線(xiàn)性范圍更寬，靈敏度更高。

本試劑盒可以用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測，或一些藥物誘導的細胞生長(cháng)抑制檢測。

本試劑盒檢測便捷，使用方便。僅含一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，無(wú)須再進(jìn)行任何配制等操作。無(wú)須使用同位素，所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內完成。不必洗滌細胞，不必收集細胞，也不必采用額外的步驟去溶解甲臜。特別適用于大批量樣品的檢測。

另外，酚紅和血清對本試劑盒的測定無(wú)明顯影響。

WST-8對細胞無(wú)明顯毒性。加入CCK-8溶液顯色后，可以在不同時(shí)間反復用酶標儀讀板，使檢測時(shí)間更加靈活，便于找到最佳測定時(shí)間。

本試劑盒可以測定100個(gè)或500個(gè)樣品。

●  保存條件：

CCK-8 溶液在避光，0-5℃的條件下可以保存一年，如長(cháng)期保存，可在-20℃下保存 2 年，如需經(jīng)常使用請將試劑存放在 0-5℃，為防止背景值增加干擾實(shí)驗結果，請勿反復凍融。

● 操作步驟：

1.  在 96孔板中接種細胞懸液(100 μl /孔)，通常細胞增殖實(shí)驗每孔約2000 個(gè)細胞，細胞毒

性實(shí)驗每孔約5000 個(gè)細胞，具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等因素決定)。

2.  按照實(shí)驗需要，進(jìn)行培養并給予0-10 μl特定的藥物刺激，處理一段適當的時(shí)間(例如: 6,12,

24或48小時(shí))。

3.  每孔加入10 μl CCK-8 溶液。如果起始的培養體積為200 μl，則需加入20 μl CCK-8溶液，以此類(lèi)推?？梢杂眉酉鄳考毎囵B基和 CCK-8但不加細胞的孔作為空白對照，若擔心所使用的藥物會(huì )干擾檢測，需設置加相應量細胞培養液、藥物和 CCK-8 溶液但不加細胞的孔作為空白對照。

4.  在細胞培養箱內繼續孵育1-4小時(shí)，具體時(shí)間可以通過(guò)預實(shí)驗確定。預實(shí)驗時(shí)可以在0.5、

2和4 小時(shí)后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續實(shí)驗。

5.  用酶標儀測定在450 nm處的吸光值，若無(wú)450nm濾光片，可以使用420-480nm 的濾光

片。如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，可以使用大于 600nm的波長(cháng)，例如650nm，作為參考波長(cháng)進(jìn)行雙波長(cháng)測定。

6.  如果需要暫時(shí)不測定 OD值，可以向每孔中加入10 μl0.1MHCl 溶液或者1%(w/v)的 SDS溶液，避光保存在室溫，24 小時(shí)內吸光度不會(huì )發(fā)生變化。  

● 注意事項：

1.  使用96 孔板進(jìn)行檢測時(shí)，如果細胞培養時(shí)間較長(cháng)，請注意蒸發(fā)問(wèn)題?？蓪?6 孔板外圍一圈加培養基、水或 PBS保濕。同時(shí)，可以把96孔板置于培養箱內靠近水盤(pán)的位置以緩解蒸發(fā)。

2.  培養時(shí)間根據細胞種類(lèi)的不同和每孔內細胞數量的多少而不同。在正式實(shí)驗前，建議先做預實(shí)驗摸索鋪板的細胞數量以及加入CCK-8 試劑后的培養時(shí)間。

3.  鋪板時(shí)請注意保證每個(gè)孔細胞數量均勻，建議鋪板過(guò)程中注意時(shí)?；靹?，防止因細胞沉淀造成不均勻。加入CCK-8 后請前后左右輕輕晃動(dòng)培養板數次，使培養基和CCK-8 溶液充分混勻。

4.  本試劑盒的檢測依賴(lài)于脫氫酶催化的反應，如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性，可在加CCK-8  之前更換新鮮培養基，去掉藥物的影響。若藥物影響比較小的情況可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

5.  加入CCK-8 時(shí)，如果細胞培養時(shí)間較長(cháng)，培養基顏色或 pH值已變化，建議換用新鮮的培養基。

6.  用酶標儀檢測前需確保每個(gè)孔內沒(méi)有氣泡，否則會(huì )干擾測定。

7.  本試劑盒系無(wú)菌灌裝生產(chǎn)。在使用過(guò)程中，請在生物安全柜內無(wú)菌操作，避免污染。

CCK-8

使用該產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：

1. [2022 IF=2.6] Upregulation of Protease-Activated Receptor 2 Promotes Proliferation and Migration of Human Vascular Smooth Muscle Cells (VSMCs).

Author: Mei Wei, Yongsheng Liu, Mingqi Zheng, Le Wang, Fangfang Ma, Yanchao Qi, Gang Liu

Journal: Medicine Science Monotor. 2019; 25: 8854-8862

Institution：The First Hospital of Hebei Medical University

Paper link：https://www.medscimonit.com/abstract/index/idArt/917865