紅細胞裂解液
Red Blood Cell Lysis Solution
● 產(chǎn)品包裝:
產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱(chēng)
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產(chǎn)品包裝
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說(shuō)明書(shū)
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RL1050-120ml
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紅細胞裂解液
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120 ml
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1份
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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer),也稱(chēng)ACK Lysis Buffer,是一種用于從人或鼠等的血液或組織樣品中裂解并去除無(wú)細胞核紅細胞的溶液。
本裂解液經(jīng)過(guò)優(yōu)化配方,在裂解紅細胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細胞(lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。本裂解液的主要有效成分為氯化銨。本裂解液不適用于有細胞核紅細胞的裂解,例如鳥(niǎo)或禽類(lèi)的紅細胞。
本產(chǎn)品已經(jīng)經(jīng)過(guò)過(guò)濾處理,溶液為澄清透明溶液。如果要使用該產(chǎn)品處理過(guò)的血液或組織細胞樣品用于后續的原代培養、細胞融合等細胞培養實(shí)驗,建議客戶(hù)將溶液經(jīng)過(guò)0.22 μm濾膜抽濾后使用。如果使用該產(chǎn)品處理的樣品進(jìn)行核酸或蛋白提取及常規分析測試,可以直接使用該產(chǎn)品。
● 保存及運輸:
4℃保存,一年有效;常溫運輸。
● 使用說(shuō)明:
對于組織細胞樣品需要洗滌液的常規操作步驟:
1. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理,通過(guò)適當方法分散成細胞懸液,離心棄上清。
2. 加入3-5倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體積為1ml,則加入3-5ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。
3. 400-500g常溫離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現紅細胞裂解不完全,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會(huì )影響后續的些檢測。
5. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,重懸沉淀,400-500g常溫離心2-3分鐘,棄上清??稍僦貜?/span>1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。
6. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。
對于組織細胞樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟:
1. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理,通過(guò)適當方法分散成細胞懸液,離心棄上清。
2. 對于0.2ml細胞沉淀加入1ml紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。
3. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,混勻。
4.
400-500g常溫離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
5. 如果發(fā)現紅細胞裂解不完全,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會(huì )影響后續的一些檢測。
6. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。
說(shuō)明:對于常規步驟,多一步洗滌過(guò)程中的離心,但可以節省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同時(shí)不需要大體積的離心管??焖俨襟E少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。
對于血液樣品需要洗滌的常規操作步驟:
1. 取新鮮抗凝血,400-500g離心5分鐘,離心棄上清。
2. 加入6-10倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體積為1ml,則加入6-10ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意:對于鼠的血液,裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長(cháng)裂解時(shí)間至4-5分鐘,并且裂解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細胞裂解。
3.
400-500g常溫離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現紅細胞裂解不完全,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會(huì )影響后續的一些檢測。
5. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,重懸沉淀,400-500g常溫離心2-3分鐘,棄上清??稍僦貜?/span>1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。
6. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。
注意:對于微量或少量的血液樣品,可以在第一步中不進(jìn)行離心棄上清的操作,直接在第二步中加入10倍血液體積的紅細胞裂解液,并在室溫或4℃裂解4-5分鐘。對于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長(cháng)裂解時(shí)間至10分鐘,但通常不宜超過(guò)15分鐘,并且裂解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細胞裂解。后續步驟相同。
對于血液樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟:
1. 每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解4-5分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。注意:對于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長(cháng)裂解時(shí)間至10分鐘,但通常不宜超過(guò)15分鐘,并且裂解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細胞裂解。
2. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,混勻。
3.
400-500g常溫離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現紅細胞裂解不完全,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會(huì )影響后續的一些檢測。
5. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。
說(shuō)明:對于常規步驟,多一步洗滌過(guò)程的離心,但可以節省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同時(shí)不需要大體積的離心管??焖俨襟E少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。