JM109化學(xué)克隆感受態(tài)細胞

目錄號：RTX301

儲存條件：-70℃凍存六個(gè)月

產(chǎn)品包裝：

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本公司生產(chǎn)的JM109感受態(tài)細胞采用經(jīng)特殊工藝處理得到，可用于DNA的化學(xué)轉化。使用pUC18質(zhì)粒檢測，轉化效率可達10⁸cfu/μg，-70℃保存幾個(gè)月轉化效率不發(fā)生改變。

JM109菌株介紹：

基因型：endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk^-,mk⁺) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqI ^qZΔM15]

特點(diǎn)：用于藍白斑篩選；recA1和 endA1 的突變有利于克隆 DNA 的穩定和高純度質(zhì)粒DNA 的提取。

操作方法：（以下操作均按無(wú)菌條件的標準進(jìn)行）

1取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無(wú)菌預冷的離心管中，置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據實(shí)際情況分裝使用。應注意所用DNA體積不要超過(guò)感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。

以下實(shí)驗以100 μl感受態(tài)細胞為例。

2   向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（50 μl的感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置30分鐘。

3   將離心管置于42℃水浴中放置45秒，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2-3分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

4   向每個(gè)離心管中加入500 μl 無(wú)菌的SOC或LB培養基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養45分鐘（150轉/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5將離心管內容物混勻，吸取100 μl已轉化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養基上，用無(wú)菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開(kāi)。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養12—16小時(shí)。

注：涂布用量可根據具體實(shí)驗來(lái)調整。如轉化的DNA總量較多，可取更少量轉化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉化的DNA總量較少，可取200—300 μl轉化產(chǎn)物涂布平板。如果預計的克隆較少，可通過(guò)離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的培養板）

注意事項：

1. 感受態(tài)細胞應保存在-70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，以避免感受態(tài)細胞的轉化效率。

2. 進(jìn)行轉化操作時(shí)，應根據相應溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。

3. 為防止轉化實(shí)驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，將損失降到最低。