超低分子量蛋白電泳試劑盒(貨號:RTD6120)
● 產(chǎn)品組成:
組分貨號
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組分
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名稱(chēng)
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規格
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貯存
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運輸
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RTD6120-01
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組分1
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2×多肽電泳濃縮膠緩沖液
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15 ml
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4℃
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常溫
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RTD6120-02
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組分2
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2×多肽電泳分離膠緩沖液
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30 ml
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4℃
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常溫
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RTD6120-03
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組分3
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2×PAA溶液 超低濃縮膠用
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15 ml
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4℃
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常溫
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RTD6120-04
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組分4
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2×PAA溶液 超低分離膠用
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30 ml
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4℃
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常溫
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AP020P
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組分5
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10% APS(干粉)
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5 ml
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常溫
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常溫
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TA0761-01
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組分6
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TEMED
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0.5 ml
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常溫
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常溫
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CB010P
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組分7
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10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)
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500 ml(干粉)
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常溫
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常溫
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TP050
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組分8
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2×Tricine 上樣緩沖液(含還原劑)
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1 ml
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-20℃
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常溫
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RTD6202-02
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組分9
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FastBlue蛋白染色液
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500 ml
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常溫
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常溫
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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
本試劑盒含有超低分子量蛋白電泳(多肽電泳)全套試劑,可以用來(lái)檢測1-20kd的多肽大小。本試劑盒可配制至少10塊常規大小的PAGE膠(8×10cm)。具有以下特點(diǎn):
1 適用范圍廣:2×多肽電泳緩沖液和2×PAA溶液中不含有SDS,適用于多肽的變性和非變性電泳。
2 分辨率高:凝膠緩沖液獨特配方,可以有效分離1-5kD多肽。
3 穩定性高:凝膠緩沖液pH為中性,存放時(shí)間長(cháng)。
4 使用方便:配制凝膠時(shí)只需1:1混合2×凝膠緩沖液和2×PAA溶液,加上APS和TEMED即可配制凝膠。
● 貯存和效期:
按照標簽溫度貯存;開(kāi)封后有效期一年。
● 使用說(shuō)明:
一. 10% APS配制:
10% APS配制-5 ml:將APS干粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解后分裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少常溫存放時(shí)間,以防失效。10%APS在4℃有效期為一周,-20℃有效期6個(gè)月。若發(fā)現凝膠聚合時(shí)間延長(cháng),應考慮更換使用-20度保存的10% APS。
二. 制膠:
I 配制分離膠
1.按照表一將不同體積的成分加入到小燒杯或離心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。
表一 (一塊1 mm mini膠用量)*
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分離膠
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濃縮膠
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18%T /5 ml
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5%T /2 ml
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2×多肽電泳濃縮膠緩沖液
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/
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1 ml
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2×多肽電泳分離膠緩沖液
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2.5 ml
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/
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2×PAA溶液 超低濃縮膠用
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/
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1 ml
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2×PAA溶液 超低分離膠用
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2.5 ml
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/
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10%APS
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25-50 μl**
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20-30 μl
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TEMED
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2.5-5 μl
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2 μl
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注: * 如非必須,不要使用厚度1.5mm的凝膠,盡量使用厚度0.75m和1mm的凝膠,這樣會(huì )減少電泳后染色和脫色的時(shí)間。
** 凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí),聚合較快;冬天氣溫低時(shí),聚合時(shí)間會(huì )延長(cháng)??梢愿鶕矶臉藴蕳l件調節催化劑的加入量。
表二 超低凝膠制備凝固時(shí)間表
環(huán)境溫度
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20℃
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25℃
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分離膠配制
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濃縮膠配制
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分離膠配制
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濃縮膠配制
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分離膠配制量
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5 ml
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-
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5 ml
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-
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濃縮膠配制量
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-
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2 ml
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-
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2 ml
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10%APS
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50 μl
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20 μl
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25 μl
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20 μl
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TEMED
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5 μl
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2 μl
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2.5 μl
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2 μl
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凝固時(shí)間
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5-10 分鐘
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20-30 分鐘
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5-10 分鐘
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20-30 分鐘
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2.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液,然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的無(wú)水乙醇層,使凝膠表面保持平整。
3.靜置5-10分鐘,待分離膠和乙醇層之間出現一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。
II 配制濃縮膠
去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。
1.按照表一將不同成分加入到小燒杯或離心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。
2.將梳子插入凝膠內,避免產(chǎn)生氣泡。
3.靜置20-30分鐘待凝膠聚合
三. 電泳:
1. 10×Tricine-Tris-SDS緩沖液配制:
將10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)粉末(Cat No:CB010P)置于一干凈的一升燒杯中,加入500ml超純水,徹底攪拌混勻,不要調節pH,即配成500ml 10×TTS緩沖液。
表三 1×TTS緩沖液配制
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1×TTS配制量 500 ml
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1×TTS配制量 1000 ml
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10×TTS
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50 ml
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100 ml
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超純水
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450 ml
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900 ml
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注:伯樂(lè )Mini III電泳槽一次電泳使用500ml 1×TTS緩沖液。
2. 樣品處理:
待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液[Cat No:TP050]等體積混合,95℃處理5-10分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經(jīng)含有上樣緩沖液,根據說(shuō)明書(shū)上樣(預染Marker不能加熱處理,非預染Marker上樣前一般要95℃處理5-10分鐘)。
將電泳槽的內槽加滿(mǎn)1×TTS緩沖液,輕柔拔出梳子,用1ml移液器將梳孔吹洗干凈,將Marker或蛋白樣品(已經(jīng)過(guò)處理)加入點(diǎn)樣孔,穩壓電泳(表四),至藍色指示前沿至分離膠下沿位置時(shí)即可停止電泳。整個(gè)電泳過(guò)程大約需要2.5-3個(gè)小時(shí)。
表四 多肽電泳條件
恒電壓
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150V
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起始電流
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60-75mA/板膠
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結束電流
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15-25mA/板膠
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電泳時(shí)間
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2.5-3小時(shí)
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四. 染色(使用組分9-FastBlue蛋白染色液):
● 用前必讀:
1 使用前如發(fā)現瓶中有少許沉淀,請混勻后使用。
2以下“使用方法”是針對0.75mm和1.0
mm厚度,10×10cm凝膠染色程序。
● 使用方法:
1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,加入適量染色液(以剛剛覆蓋過(guò)膠面為適),條帶1-2分鐘即可見(jiàn)。
2. 搖床上常溫搖動(dòng)10-15分鐘。
3. 觀(guān)察結果。
● 注意事項:
1. 使用方法中的各種參數僅針對面積8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm和1mm的凝膠,如果使用更大面積或更厚的凝膠,請加入更多的染色液并延長(cháng)染色的時(shí)間。
2. 常規染色所需的漂洗,固定,脫色步驟都無(wú)必要。
3. 本染色液可以重復利用1-2次,敏感性會(huì )有輕微下降,請延長(cháng)染色時(shí)間。
4.
本染色液有輕微腐蝕性,請帶手套操作。使用后,請蓋好瓶蓋,常溫密封保存。
緩沖液配方:
1.
10x Tricine-Tris-SDS緩沖液 (1
L) (Cat No:CB010P)
組分濃度:1 MTris,1 MTricine, 1% SDS
Tris
base 121.1 g
Tricine 179.2 g
SDS 10 g
ddH2O to1 L
Do not
adjust the pH (~pH 8.3)
2. 2×Tricine蛋白樣品加樣緩沖液(10ml) (Cat No:TP050)
組分濃度:100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT,0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250
1ml 1MTris-Cl pH6.8
2.4ml 甘油
0.8g SDS
0.31gDTT
2mg 考馬斯亮藍G-250
用滅菌ddH2O定容至10ml
混勻分裝-20℃貯存備用
多肽電泳配套試劑
使用該產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表:
1. [2016 IF=1.75] Metal-Chelate Affinity Precipitation with Thermo-Responsive Polymer
for Purification of ε-Poly-L-Lysine.
Product:RTD6120 超低分子量蛋白電泳試劑盒
Author: Sipeng Li, Zhaoyang Ding, Jifu Liu, Xuejun Cao.
Journal: Appl Biochem
Biotechnol. May 20 2017.
Institution:East
ChinaUniversity of Science and Technology
Paper link: https://link.springer.com/article/10.1007/s12010-017-2495-3
2. [2020 IF=2.896] Rapid and sensitive detection of
Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumonia based on bacitracin-modified
Fe3O4@PDA magnetic beads combined with matrix-assisted laser desorption
ionization-time of flight mass spectrometry.
Product:RTD6120 超低分子量蛋白電泳試劑盒;RTD6110 彩虹預染超低分子量蛋白Marker
Author: Feng Qin,Xiangmin Zhang
Journal: Analytical
Methods 2021,13,2804
Institution: Department of Chemistry, Fudan
University,
Paper link:https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34075956/