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超低分子量蛋白電泳試劑盒(變性電泳)

超低分子量蛋白電泳試劑盒(變性電泳)

產(chǎn)品編號:RTD6120

產(chǎn)品規格:10次

相關(guān)規格:
數量
價(jià)格 ¥1000

超低分子量蛋白電泳試劑盒(貨號:RTD6120)

●     產(chǎn)品組成:

組分貨號

組分

名稱(chēng)

規格

貯存

運輸

RTD6120-01

組分1

2×多肽電泳濃縮膠緩沖液

15 ml

4

常溫

RTD6120-02

組分2

2×多肽電泳分離膠緩沖液

30 ml

4

常溫

RTD6120-03

組分3

2×PAA溶液 超低濃縮膠用

15 ml

4

常溫

RTD6120-04

組分4

2×PAA溶液 超低分離膠用

30 ml

4

常溫

AP020P

組分5

10% APS(干粉)

5 ml

常溫

常溫

TA0761-01

組分6

TEMED

0.5 ml

常溫

常溫

CB010P

組分7

10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)

500 ml(干粉)

常溫

常溫

TP050

組分8

2×Tricine 上樣緩沖液(含還原劑)

1 ml

-20

常溫

RTD6202-02

組分9

FastBlue蛋白染色液

500 ml

常溫

常溫

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

本試劑盒含有超低分子量蛋白電泳(多肽電泳)全套試劑,可以用來(lái)檢測1-20kd的多肽大小。本試劑盒可配制至少10塊常規大小的PAGE膠(8×10cm)。具有以下特點(diǎn):

1 適用范圍廣:2×多肽電泳緩沖液和2×PAA溶液中不含有SDS,適用于多肽的變性和非變性電泳。

2 分辨率高:凝膠緩沖液獨特配方,可以有效分離1-5kD多肽。

3 穩定性高:凝膠緩沖液pH為中性,存放時(shí)間長(cháng)。

4 使用方便:配制凝膠時(shí)只需1:1混合2×凝膠緩沖液和2×PAA溶液,加上APS和TEMED即可配制凝膠。

貯存和效期:

按照標簽溫度貯存;開(kāi)封后有效期一年。

使用說(shuō)明:

. 10% APS配制:

10% APS配制-5 ml將APS干粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解后分裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少常溫存放時(shí)間,以防失效。10%APS在4℃有效期為一周,-20℃有效期6個(gè)月。若發(fā)現凝膠聚合時(shí)間延長(cháng),應考慮更換使用-20度保存的10% APS。

. 制膠:

I 配制分離膠

1.按照表一將不同體積的成分加入到小燒杯或離心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

表一  (一塊1 mm mini膠用量)*

 

分離膠

濃縮膠

 

18T /5 ml

5T /2 ml

2×多肽電泳濃縮膠緩沖液

/

1 ml

2×多肽電泳分離膠緩沖液

2.5 ml

/

2×PAA溶液 超低濃縮膠用

/

1 ml

2×PAA溶液 超低分離膠用

2.5 ml

/

10APS

25-50 μl**

20-30 μl

TEMED

2.5-5 μl

2 μl

注: * 如非必須,不要使用厚度1.5mm的凝膠,盡量使用厚度0.75m和1mm的凝膠,這樣會(huì )減少電泳后染色和脫色的時(shí)間。

** 凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí),聚合較快;冬天氣溫低時(shí),聚合時(shí)間會(huì )延長(cháng)??梢愿鶕矶臉藴蕳l件調節催化劑的加入量。

表二 超低凝膠制備凝固時(shí)間表

環(huán)境溫度

20

25

 

分離膠配制

濃縮膠配制

分離膠配制

濃縮膠配制

分離膠配制量

5 ml

-

5 ml

-

濃縮膠配制量

-

2 ml

-

2 ml

10%APS

50 μl

20 μl

25 μl

20 μl

TEMED

5 μl

2 μl

2.5 μl

2 μl

凝固時(shí)間

5-10 分鐘

20-30 分鐘

5-10 分鐘

20-30 分鐘

2.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液,然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的無(wú)水乙醇層,使凝膠表面保持平整。

3.靜置5-10分鐘,待分離膠和乙醇層之間出現一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。

II 配制濃縮膠

去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。

1.按照表一將不同成分加入到小燒杯或離心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

2.將梳子插入凝膠內,避免產(chǎn)生氣泡。

3.靜置20-30分鐘待凝膠聚合

. 電泳:

1. 10×Tricine-Tris-SDS緩沖液配制:

將10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)粉末(Cat NoCB010P)置于一干凈的一升燒杯中,加入500ml超純水,徹底攪拌混勻,不要調節pH,即配成500ml 10×TTS緩沖液。

表三 1×TTS緩沖液配制

 

1×TTS配制量 500 ml

1×TTS配制量 1000 ml

10×TTS

50 ml

100 ml

超純水

450 ml

900 ml

注:伯樂(lè )Mini III電泳槽一次電泳使用500ml 1×TTS緩沖液。

2. 樣品處理:

  待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液[Cat NoTP050]等體積混合,95℃處理5-10分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經(jīng)含有上樣緩沖液,根據說(shuō)明書(shū)上樣(預染Marker不能加熱處理,非預染Marker上樣前一般要95℃處理5-10分鐘)。

將電泳槽的內槽加滿(mǎn)1×TTS緩沖液,輕柔拔出梳子,用1ml移液器將梳孔吹洗干凈,將Marker或蛋白樣品(已經(jīng)過(guò)處理)加入點(diǎn)樣孔,穩壓電泳(表四),至藍色指示前沿至分離膠下沿位置時(shí)即可停止電泳。整個(gè)電泳過(guò)程大約需要2.5-3個(gè)小時(shí)。

表四 多肽電泳條件

恒電壓

150V

起始電流

60-75mA/板膠

結束電流

15-25mA/板膠

電泳時(shí)間

2.5-3小時(shí)

四. 染色(使用組分9-FastBlue蛋白染色液):

用前必讀:

1 使用前如發(fā)現瓶中有少許沉淀,請混勻后使用。

2以下“使用方法”是針對0.75mm1.0 mm厚度,10×10cm凝膠染色程序。

使用方法:

1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,加入適量染色液(以剛剛覆蓋過(guò)膠面為適),條帶1-2分鐘即可見(jiàn)。

2. 搖床上常溫搖動(dòng)10-15分鐘。

3. 觀(guān)察結果。

注意事項:

1. 使用方法中的各種參數僅針對面積8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm和1mm的凝膠,如果使用更大面積或更厚的凝膠,請加入更多的染色液并延長(cháng)染色的時(shí)間。

2. 常規染色所需的漂洗,固定,脫色步驟都無(wú)必要。

3. 本染色液可以重復利用1-2次,敏感性會(huì )有輕微下降,請延長(cháng)染色時(shí)間。

4. 本染色液有輕微腐蝕性,請帶手套操作。使用后,請蓋好瓶蓋,常溫密封保存。

 緩沖液配方:

1. 10x Tricine-Tris-SDS緩沖液 (1 L)    (Cat No:CB010P) 

組分濃度:1 MTris,1 MTricine, 1% SDS

Tris base 121.1 g

Tricine    179.2 g

SDS         10 g

ddH2O      to1 L 

Do not adjust the pH (~pH 8.3)


2. 2×Tricine蛋白樣品加樣緩沖液(10ml)  (Cat No:TP050)

組分濃度:100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT,0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250

1ml 1MTris-Cl pH6.8

2.4ml 甘油

0.8g  SDS

0.31gDTT

2mg 考馬斯亮藍G-250

用滅菌ddH2O定容至10ml

混勻分裝-20℃貯存備用


多肽電泳配套試劑

名稱(chēng)

貨號

規格

超低分子量蛋白電泳試劑盒

RTD6120

10

超低分子量蛋白Marker I3.3-20.1 kD

RTD6101

10次(100 μl

超低分子量蛋白Marker III3.4-100 kD

RTD6125

10次(50 μl

彩虹預染超低分子量蛋白Marker1.2-45 kD

RTD6110

10 50 μl

彩虹預染超低分子量蛋白Marker II3-40 kD

RTD6145-01

10 50 μl

40% PAA19:1

AC1914-01

100ml

40% PAA29:1

AC2914-01

100ml

多肽電泳凝膠緩沖液

GB010-100ml

100ml

2×Tricine 上樣緩沖液(變性,還原)

TP050

10×1ml

FastBlue蛋白染色液

RTD6202

500ml

乙二醇(電泳級)

EA0582-02

100 ml

10×Tris-Tricine-SDS緩沖液(變性電泳,粉末型)

CB010P

500 ml

10×陽(yáng)極緩沖液 (多肽電泳用

AB080

250 ml

10×陰極緩沖液(多肽電泳用)

CB010

100 ml

 


使用該產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表:

1. [2016 IF=1.75] Metal-Chelate Affinity Precipitation with Thermo-Responsive Polymer for Purification of ε-Poly-L-Lysine.

ProductRTD6120 超低分子量蛋白電泳試劑盒

Author: Sipeng Li, Zhaoyang Ding, Jifu Liu, Xuejun Cao.

Journal: Appl Biochem Biotechnol. May 20 2017.

InstitutionEast ChinaUniversity of Science and Technology

Paper link https://link.springer.com/article/10.1007/s12010-017-2495-3

 

2. [2020 IF=2.896] Rapid and sensitive detection of Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumonia based on bacitracin-modified Fe3O4@PDA magnetic beads combined with matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry. 

ProductRTD6120 超低分子量蛋白電泳試劑盒;RTD6110 彩虹預染超低分子量蛋白Marker

Author: Feng Qin,Xiangmin Zhang 

Journal: Analytical Methods 2021,13,2804

Institution Department of Chemistry, Fudan University,

Paper linkhttps://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34075956/

 

 


 
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